大腸桿菌的應用與菌株分類
大腸桿菌（Escherichia coli，E.coli） 革蘭氏陰性短桿菌，大小0.5×1～3微米。周生鞭毛，能運動，無芽孢。能發酵多種糖類產酸、產氣，是人和動物腸道中的正常棲居菌，嬰兒出生后即隨哺乳進入腸道，與人終身相伴，幾乎占糞便干重的1/3。規定，每毫升飲用水中的菌落總數小于100，每100毫升水中不得檢出總大腸菌群。下面就讓小編帶你了解一下大腸桿菌在生物技術中的應用以及其分類。
大腸桿菌在生物技術中的應用：
作為外源基因表達的宿主，大腸桿菌具有清晰的遺傳背景，簡便的技術操作步驟，簡單的培養條件，能夠進行大規模發酵，是目前最成功，得到最廣泛應用的表達體系，常常被作物表達的體系，倍受遺傳工程專家的重視。它的基因組DNA是擬核中的一個環狀分子，能夠同時有多個環狀質粒DNA。大腸桿菌細胞的擬核有1個DNA分子，大約有4700000個堿基對那么長，大概有4400個基因分布在DNA分子上，每個基因平均大概有1000個堿基對那么長。
除了少數幾個例外，在DNA重組實驗中所用的菌株以及分子生物學中常用的大腸桿菌菌株均是大腸桿菌菌株K12的衍生物。在遺傳、生化代謝等方面這些突變菌株各有不同程度的差異，對于做不同自菌株基因很適合。

大腸桿菌的分類
1：HB101菌株
特點：該菌株具有穩定的遺傳性能，可以方便的使用，對于各種基因重組實驗均適宜。
基因型：SCS110或thi-1M110，leuB6，mtl-1，xyl-5，rpsL20，galK2，lacY1，proA2，ara－14，recA13，hsdS20（rB-mB－），supE44。

2：TOP10菌株
特點：該菌株對于的DNA克隆和質粒擴增很適用，能夠使得高拷貝質粒的穩定遺傳得到確保。
基因型：nupG，(Strr)endA1，galK，rps，galU，araΔ139Δ(ara-leu)7697，recA1，△lacⅩ74，lacZΔM15，φ80，F-，mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)。

3：JM109菌株
特點：該菌株在用M13phage載體進行轉染或使用pUC系列質粒載體進行DNA轉化時，因為JM09編碼的LacZΔM15和載體DNA產生的LacZa多肽進行α－互補，因而使得β－半乳糖苷酶活性顯示出來，因此重組體菌株很容易被鑒別出來。
基因型：Δ（lac－proAB）/F’，relA1，supE44，hsdR17，thi－1，gyrA96，endA1，recA1。

4：BL21(DE3)pLysS菌株
特點：該菌株由于含有質粒pLysS，所以具有氯霉素抗性。PLysS包含表達T7溶菌酶的基因，可以使目的基因的背景表達水平降低卻不對目的蛋白的表達有所干擾。該菌株對于毒性蛋白和非毒性蛋白的表達很適合。
基因型：dcm（DE3，pLysS，Camr），gal，ompThsdS（rBB-mB－），F-。

5：BL21(DE3)菌株
特點：該菌株被用來對克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達載體（如pET系列）的基因表達。T7噬菌體RNA聚合酶位于λ噬菌體DE3區，λ噬菌體DE3區在BL21的染色體上整合。該菌株對于非毒性蛋白的表達很適合。
基因型：dcm（DE3），gal，hsdS（rBB-mB－），ompT，F-。

6：DH5a菌株
DH5a菌株常被用于質粒克隆。E.coliDH5a在使用pUC系列質粒載體轉化時，可與載體編碼的β－半乳糖苷酶氨基端實現α－互補。可以起到對菌株進行藍白斑篩選鑒別重組的作用。
基因型：relA1，gyrA96，thi-1，λ-，supE44，phoA，hsdR17(rk-，mk+)，endA1，recA1，deoRΔ(lacZYA-argF)U169，，φ80dlacZΔM15，F-。

大腸桿菌轉化操作步驟

我們都知道大腸桿菌轉化可以：
（1）將重組DNA分子導入大腸桿菌受體細胞進行復制，增殖和表達，以獲得目的基因；
（2）驗證大腸桿菌感受態細胞效果；
（3）用于分子生物學其他研究。

大腸桿菌轉化操作步驟：
（1）事先將恒溫水浴的溫度調到42℃。
（2）從-70℃ 超低溫冰柜中取出一管（100μl）感受態菌，立即用手指加溫融化后插入冰上，冰浴5~10min。
（3） 加入5μl連接好的質?；旌弦海―NA含量不超過100ng），輕輕震蕩后放置冰上20min。
（4） 輕輕搖勻后插入42℃水浴中1~2min進行熱休克，然后迅速放回冰中，靜置3~5min。
（5） 在超凈工作臺中向上述各管中分別加入500μl LB培養基（不含抗菌素）輕輕混勻，然后固定到搖床的彈簧架上37℃震蕩1h.細胞
（6） 在超凈工作臺中取上述轉化混合液100~300μl，分別滴到含合適抗菌素的固體LB平板培養皿中，用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻（注意：玻璃涂布棒上的酒精熄滅后稍等片刻，待其冷卻后再涂）。
（7） 如果載體和宿主菌適合藍白斑篩選的話，滴完菌液后再在平板上滴加40μl 2% X-gal，8μl 20% IPTG，用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻。
（8） 在涂好的培養皿上做上標記，先放置在37℃恒溫培養箱中30-60min直到表面的液體都滲透到培養基里后，再倒置過來放入37℃恒溫培養箱過夜。
（9） 在被細菌污染的桌面上噴灑70%乙醇，擦干桌面，寫實驗報告。
（10）觀察平板上長出的菌落克隆，以菌落之間能互相分開為好。注意白色菌斑