外源基因的表達需要經過轉錄（mRNA生成）、翻譯（蛋白質合成）、修飾等過程，最后才能形成具有生物學活性的蛋白質分子，因此，對一個基因表達的檢測，可以從其表達過程的不同階段來進行。

轉錄水平指的是mRNA的表達水平，然后mRNA經過翻譯成為目的蛋白。mRNA的檢測是研究基因表達盒功能的重要，常用方法，通過mRNA的分析，可以大致估計一種基因的翻譯水平，但mRNA不能代替蛋白質水平的分析，因為還有翻譯效率和RNA降解速度，以及蛋白質剪切和分解速度等因素的影響。目前檢測mRNA的方法包括Northern印跡（Northern blot）、逆轉錄-聚合鏈式反應（RT-PCR）、實時定量PCR（real time PCR）以及核糖核酸酶保護分析（RPA）等。

Northern印跡技術
一、原理
在變性條件下將待檢的RNA樣品進行瓊脂糖凝膠電泳，繼而進行轉膜和用探針進行雜交檢測，檢測樣品中是否含有基因的轉錄產物及含量。

二、操作步驟
1、制膠
稱取0.42g瓊脂糖加入三角瓶中，加入DEPC水30.4ml，微波加熱溶解。在通風櫥中加入3.6ml的10xMOPS電泳緩沖液和1.05ml甲醛，輕輕震蕩混勻，放入60度水浴中。將溶膠倒入制膠板中，插上梳子。凝固后轉移如電泳槽，加1xMOPS電泳緩沖液。
2、RNA樣品制備
在RNA樣品中（0.5-10微克）加入10xMOPS電泳緩沖液、8.75微升甲醛、25微升甲酰胺，混勻后65度保持15min。短暫低速離心后立即放冰上5min。每份RNA樣品加入10微升加樣緩沖液。

3、電泳
將RNA樣品加入上樣孔電泳，當膠中的溴酚藍接近膠邊緣時終止電泳，在LUYOR-3410高強度紫外線燈下，用尺子測量18SRNA、28SRNA、溴酚藍到點樣孔的距離
4轉膜
用3%的雙氧水侵泡真空轉移儀，用DEPC水沖洗。用RNAZap擦洗電極板和轉移框，用DEPC水沖洗2次。連接真空泵和真空轉移儀，剪取1塊合適大小的轉印膜，轉印膜在20xssc潤濕5min，放在電極板適當的位置。將膠的多余部分切除，切后膠的大小與轉印膜一致。將較放在膜上，排出氣泡。封閉轉移框，打開真空泵壓力維持在50-58mbar，立即將20xSSC加到膠面和四周，每隔10min在膠面上加1ml20xSSC，真空轉移2h。轉膜后，用鑷子夾住膜，在1xMOPS中泡洗10s，去除殘余的膠和鹽。用吸水紙洗去膜上多余的液體后，將膜置于紫外交聯儀中自動交聯。將膠和紫外交聯后的膜，于LUYOR-3410高強度紫外線燈下檢測轉移效率。將膜在-20度保存。

5探針的準備
（1）、在1.5ml離心管中配置以下反應液：模板DNA（25ng）1微升，隨機引物2微升，滅菌水11微升，總體積14微升。
（2）95度加熱3min后，迅速放置于冰上冷卻5min
（3）在離心管中按照下列順序加入溶液：10x緩沖液2.5ul，DNTP混合物2.5ul，32P-dCTP 5ul，Exo-free Klenow Fragment 1ul
（4）混勻后，37度反應30min，短暫離心，收集溶液。
（5）65度加熱5min使酶失活。

6、探針的純化及比活性測定
（1）將1g凝膠加入30ml的DEPC水中，侵泡過夜。用DEPC水洗滌膨脹的凝膠數次，以除去可溶解的葡聚糖。換用新配的TE緩沖液（PH7.6）
（2）在1ml注射器層析柱中填裝Sephadex G50凝膠。
（3）將注射器放入一只15ml離心管中，注射器把手架在離心管口，1600g離心4min，凝膠壓緊后，補加Sephadex G50凝膠，重復此步驟直到凝膠高度達到0.9ml。
（4）用100ul STE緩沖液洗柱，1600g離心4min。重復3次。
（5）倒掉離心管中的溶液，將一去蓋的1.5ml離心管置于管中，再將裝填了凝膠的注射器插入離心管，注射器口對準1.5ml離心管。
（6）將標記的DNA樣品加入25ul STE
（7）1600G離心4min，DNA將流出并被收集在去蓋的離心管中，而未摻入DNA的dNTP則保留在色譜柱中。
（8）測比活性（要求106cpm/ml）

7、預雜交
（1）將Northern預雜交緩沖液在雜交爐中68度預熱，并渦旋使未溶解的物質溶解。
（2）加入適當 的預雜交緩沖液到雜交袋中，42度預雜交4h

8、探針變性

（1）用10mmol/L EDTA將探針稀釋10倍。
（2）90度熱處理稀釋的探針10min后，立即放置冰上5min
（3）短暫離心，將溶液收集在管底。

9、雜交
（1）加入0.5ml雜交緩沖液到變性的探針中，混勻。
（2）從雜交袋中移出預雜交緩沖液后，將含探針的雜交緩沖液加入
（3）42度雜交過夜（14-24h）

10、洗膜
（1）1xSSC加入0.1%SDS，（100cm2膜面積加入20ml），室溫下晃動洗膜15min，2次。
（2）0.25xSCC加入0.1%SDS，（100cm2膜面積加入20ml），室溫下晃動洗膜15min，2次。

11曝光
（1）將膜從洗膜液中取出，用保鮮膜包住，以防干燥
（2）檢查膜上放射性強度，估計曝光時間
（3）將X射線底片覆蓋于膜上，曝光
（4）沖洗X射線底片，掃描結果。