抗體保存指南
不同類型抗體儲存時注意要避免污染或損失

保存溫度和條件
很多抗體的更佳保存條件是分裝成小包裝凍存于-20°C 或-80°C。分裝能使凍融引起的損失減到最小，同時可避免多次在一個管內取樣而由槍頭引入的污染。分裝凍存的抗體，融解一次后剩余抗體應保存于4°C。收到抗體后，應10,000 x g 離心20 秒，使管口螺紋內的抗體溶液全部離心至管底，用低蛋白吸附性的微量離心管分裝。分裝量的多少取決于每次試驗的使用量。分裝量不能少于10μl；分裝量越少，由于蒸發(fā)和吸附于管內壁而引起的損失會越大。除了腹水液含蛋白酶應立即凍存外，大多數(shù)抗體接收后可在4°C 保存一至兩周，隨后可凍存以長期保存。同樣，應按照說明書推薦的條件進行保存。

免責聲明和其他特殊情況
酶聯(lián)抗體，不應凍存，4°C 可保證穩(wěn)定。凍融會降低酶的活性，同時影響抗體的吸附能力。偶聯(lián)標記的抗體，無論是標記的熒光染料、酶還是生物素，都應保存于深色的管內并包裹上鋁箔。如果暴露在光線下可能會減弱偶聯(lián)標記物的活性。熒光標記物尤其容易受到光漂白作用，整個實驗過程中均應避光。免疫球蛋白G3 同種型抗體凍融后易形成聚合物，因此應一直保存于4°C。

用疊氮化鈉防止污染
為防止微生物污染，在抗體溶液中應加入疊氮化鈉，終濃度為0.02%（質量百分比）。很多Abcam 的抗體已經(jīng)包含了0.02-0.05% 的疊氮化納，在說明書的“保存緩沖液”部分會有描述。

什么時候不能用疊氮化納
如果用抗體標記活細胞，或用于體內實驗，確保所用制劑中不含疊氮化鈉。這種抗生素對大多數(shù)有機體都有毒性：會阻斷細胞色素電子傳遞系統(tǒng)的信號。
疊氮化鈉會干擾胺基的偶聯(lián)標記，應在進行標記之前將其除去。標記后抗體可保存于疊氮化納，也可用不含胺基的硫柳汞替代。疊氮化鈉可用透析或凝膠過濾法從抗體溶液中除去。免疫球蛋白G 的分子量是150,000 kDa（免疫球蛋白M 的分子量是600,000 kDa），疊氮化鈉的分子量是65 道爾頓。使用14,000 kDa 的微量透析裝置，隨著疊氮化鈉的擴散，抗體將保留。將帶有燒杯的磁力攪拌器置于4°C攪拌透析裝置6 小時,每毫升抗體溶液要用至少1升的磷酸鹽緩沖液。更換2 次磷酸鹽緩沖液，每次均攪拌至少6 小時。如果可以的話，所有材料均要求無菌，所有溶液都應無菌配制。

凍存/復蘇的損失
反復凍融可使抗體變性，使其形成聚合物而降低了抗體結合能力。大多數(shù)抗體在-20°C 保存就足夠了，沒有必要置于-80°C 保存。千萬不要使用無霜的冰箱。反復凍融能減少霜的形成，但這正是應該避免的。同理，抗體應該放置于冰箱中溫度變化最小的部位，如應放置于冰箱格里，而不應放置于冰箱門上。一些研究者為防止反復凍融的損失，在抗體中加入終濃度為50% 的甘油作為抗凍劑。甘油可以將冰點降低至-20°C 以下。很多抗體都可以這樣做，本公司提供的抗體只有一小部分測試了這種保存條件下的穩(wěn)定性，我們只保證那些按照說明書推薦條件儲存的抗體有活性。由于-80°C 低于甘油的冰點，所以加了甘油的溶液不應保存于-80°C。注意，甘油可能會被細菌污染。如果要加入甘油或其他防凍劑，應注意無菌處理。

稀釋至工作濃度的抗體更好不要在4°C 保存超過時間。通常蛋白質在較高濃度保存時不易發(fā)生降解，理想濃度為1mg/ml 或更高，因為抗體溶液中包含了如牛血清白蛋白等蛋白質穩(wěn)定劑。加入的蛋白可吸附于管壁從而使抗體的損失減到最小。對用于聚合的抗體，不應加入蛋白穩(wěn)定劑，因為其可能會與抗體競爭而降低抗體的聚合活性。

抗體選擇：

選擇一抗宿主的類別
一般來說，當用標記二抗來檢測非標記一抗時，產(chǎn)生一抗的宿主動物的類別就非常重要。對于免疫組化，產(chǎn)生一抗的宿主應盡可能的和樣品的宿主種類不同，以避免二抗的免疫球蛋白與樣品中內在的免疫球蛋白發(fā)生潛在的交叉反應。例如，用于檢測鼠源蛋白的一抗就不應來源于鼠或大鼠，來源于兔則是比較適合的選擇，接下來用檢測分子（酶、熒光、生物素等）標記的抗兔IgG 的二抗進行結合。如果有已標記的一抗則可以直接避免上述交叉反應發(fā)生。對于不含內源性免疫球蛋白樣品的檢測，宿主的種類選擇不用很嚴格。例如進行western blotting 的細胞裂解液就被認為不包含IgG。而組織溶解液和組織培養(yǎng)上清（包括血清）則被認為是含免疫球蛋白的。Westernblotting 時IgG 會以50 和25kDa 的條帶出現(xiàn)在降解和變性樣品中，分別相當于IgG 分子的重鏈和輕鏈。

選擇二抗
二抗應來源于抗一抗的物種。舉例來說，如果您的一抗來源于鼠，那么二抗就應該選擇抗鼠的。我們建議仔細核對二抗數(shù)據(jù)表以確定您要使用的二抗。Abcam提供有大量標記各種熒光物質和染色物質的二抗。檢查您所用的一抗數(shù)據(jù)表的底部，將會顯示一些合適的二抗。為了找到您自己的二抗，可以使用我們的導航框或通過主頁中心的鏈接來選擇產(chǎn)品類型，然后選擇您一抗的種類，這樣會顯示大量適用于一抗種類的二抗。

雙重染色抗體的選擇
對細胞培養(yǎng)液或組織上清液進行雙免疫染色要求非標記一抗來源于不同物種的動物，而二抗則特異性識別其中一種一抗。二抗如果與其他動物來源的免疫球蛋白有交叉吸附，則會在數(shù)據(jù)表中明確說明。

熒光和染料標簽
標簽結合在抗體上使抗體的結合可見。標簽的選擇依據(jù)以下幾個方面：
1. 檢測方法：熒光或有色沉淀。熒光標簽會在特定波長的光激發(fā)下發(fā)光。根據(jù)它們自己激發(fā)和發(fā)光性質不同，有一些熒光標簽是可用的。在結合了合適的底物時，酶標簽HRP和AP可以形成有色沉淀。
2. 有效的封固劑（只限免疫組化）：AEC、Fast Red、INT或是其它的水溶性染色劑均溶于酒精，因此要求使用水溶性封固劑。以上提到的其他有機物要想得到較好的折射率，更好使用有機封固劑封固。熒光素標簽需要水溶性封固劑。膽藻素蛋白（藻青蛋白/藻紅蛋白）需要不加甘油的水溶性封固劑，否則會產(chǎn)生淬滅效應。
3. 生物素標記的抗體對于信號的放大是很有效的，比如可應用于親和素-生物素-酶或熒光復合物（通常縮寫為ABC試劑）或者親和素或鏈霉親和素結合酶或熒光染料檢測法。