dio染料激發(fā)波長是480nm，發(fā)射波長是510nm

染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一類親脂性熒光染料家族，用于標記細胞膜和疏水性組織。這是一類環(huán)境敏感型熒光染料，當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子(例如蛋白質(zhì)，雖然在水中其熒光強度很弱)結(jié)合時，其熒光強度顯著增強。它們具有很高的淬滅系數(shù)，偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。一旦應(yīng)用于細胞中，這種染料會在細胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴散，導(dǎo)致在其更佳濃度條件下，將整個細胞染色。

dio染料的激發(fā)波長和發(fā)射波長

DiO即DiOC18(3)，全稱為3,3′-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate，是最常用的細胞膜熒光探針之一，呈現(xiàn)綠色熒光。DiO是一種親脂性膜染料，進入細胞膜后可以側(cè)向擴散逐漸使整個細胞的細胞膜被染色。DiO在進入細胞膜之前熒光非常弱，僅當(dāng)進入到細胞膜后才可以被激發(fā)出很強的熒光。DiO被激發(fā)后可以發(fā)出綠色的熒光，DiO和磷酯雙層膜結(jié)合后的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考下圖。其中，更大激發(fā)波長為484nm，更大發(fā)射波長為501nm。DiO的分子式為C53H85ClN2O6，分子量為881.72，CAS number為34215-57-1。DiO可以溶解于無水乙醇、DMSO和DMF，溶解度約為1-2.5mg/ml。發(fā)現(xiàn)較難溶解時可以適當(dāng)加熱，并用超聲處理以促進溶解。

DiO被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經(jīng)等細胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑(long-term tracer)。DiO通常不會明顯影響細胞的生存力(viability)。DiO對于細胞膜染色的熒光強度通常要低于DiI，有時對于某些經(jīng)過固定的組織的染色效果欠佳。DiO除了最簡單的細胞膜熒光標記外，還可以用于檢測細胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程中細胞遷移，通過FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)檢測脂在細胞膜上的擴散，檢測細胞毒性和標記脂蛋白等。
    用于細胞膜熒光標記時，DiO的常用濃度為1-30μM，最常用的濃度為5-10μM。DiO可以直接染色活的細胞或組織，染色時間通常為5-20分鐘。對于固定的細胞或組織，通常宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛進行固定，使用其它不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ簳?dǎo)致熒光背景較高。

dio染料保存條件dio染料使用注意事項：：

4℃避光保存，一年有效。配制的儲存液-20℃避光保存，半年有效。熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。當(dāng)與細胞膜結(jié)合后其熒光強度大大增強，這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細胞染色，這類染料在整個細胞膜上擴散，zui佳濃度時可以使整個細胞膜染色。它們的熒光顏色區(qū)分明顯：DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR（深紅色熒光）這使得他們可以用來對活細胞進行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標準的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著比DiI更長的激發(fā)波長和發(fā)射波長，在細胞和組織染色中更有價值。 DiR的紅外熒光可以穿透細胞和組織，在活體成像中用來示蹤。

dio染料的使用方法

1. DiD，DiO，DiI，DiR和DiS細胞膜染色液制備
（1）配置DMSO或EtOH 儲存液：儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。注意：未使用的儲存液保存在-20℃，避免反復(fù)凍融。
（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。注意：工作液的最終濃度是根據(jù)不同細胞和實驗的經(jīng)驗來配制，可以從推薦濃度的十倍以上尋找zui佳條件。

2. 懸浮細胞染色
（1）懸浮細胞密度為 1 × 10^6/mL加入到工作液中。
（2）在37 ℃培養(yǎng)細胞 2～20分鐘，不同的細胞zui佳培養(yǎng)時間不同。
（3）染色細胞試管在1000～1500轉(zhuǎn)離心5分鐘。
（4）傾倒上清液，再次緩慢加入預(yù)溫37℃的培養(yǎng)液。
（5）重復(fù)（3），（4）步驟兩次以上。

3. 粘壁細胞的染色
（1）使粘壁的細胞在無菌實驗室培養(yǎng)。
（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。
（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。
（4）在37 ℃培養(yǎng)細胞 2～20分鐘，不同的細胞zui佳培養(yǎng)時間不同。
（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。

dio dye emission wavelength