如何快速觀察到EGFP在動植物體內的表達？

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EGFP在煙草上的表達

EGFP--Enhanced green fluorescent protein.

egfp熒光蛋白的激發光波長和egfp熒光波長光譜圖如下：

EGFP熒光蛋白的激發光主峰為488nm，EGFP熒光蛋白的熒光波長為510nm。

常用的熒光蛋白有哪些？

GFP變體
BFP–Blue-藍色熒光蛋白
CFP–藍綠色熒光蛋白
GFP–原綠色熒光蛋白
EGFP–紅移激發的增強型綠色熒光蛋白
EYFP–增強型黃色熒光蛋白
PA-GFP–光活性綠色熒光蛋白

非Aequorea victoria水母來源的FP
dsRed–珊瑚源熒光蛋白
mFruits–dsRed突變體
mCherry–常見的紅色熒光蛋白
TagRFPs–Evrogen的全光譜FP系列
eqFP611–分離自拳頭海葵(Entacmaea quadricolor)
Dronpa–光開關熒光蛋白
EosFP–光轉換熒光蛋白

EGFP和GFP熒光蛋白的區別是什么？

eGFP是增強型綠色熒光蛋白，由野生型熒光蛋白通過氨基酸突變和密碼子優化而來。eGFP而言，相對于GFP，其熒光強度更強、熒光性質更穩定。同時載體中構建的Kozak序列使得含有eGFP的融合蛋白在真核表達系統中表達效率更高。

EGFP為什么是更好的選擇？

增強型GFP或EGFP這款熒光蛋白為單體、明亮、表現良好、無侵入性且幾乎不會失效，其已經過反復驗證，因此無論您選擇何種生物體或應用，EGFP都是最理想的選擇。
與此相反，如果您需要通過紅色通道成像，則mCherry是最理想的選擇。眾多參考文獻中提及了很多紅色的FP，但是迄今還沒有任何其他FP比mCherry的發表文獻數目更多，比mCherry更適合Texas Red濾光片光立方。

BFP藍色熒光蛋白熒光強度怎么樣？

Venus是一種極其明亮的單體黃色FP，但其并不能很好地適應標準的顯微鏡濾光片組，因此在您使用Venus時難免要在捕捉信號方面耗費很多的精力，盡管該光譜的藍色末端很具吸引力，但坦白來講，除非您的靶標豐度超高，否則您不想使用大多數的藍色FP，這是因為這一類FP所發出的熒光遠較EGFP或mCherry微弱。

GFP熒光蛋白表達量很低的原因是什么？

最令人沮喪的事情莫過于，千辛萬苦將自己的融合蛋白結構導入到細胞，結果發現GFP表達水平很低甚至沒有表達。導致蛋白表達水平很低的因素包括與宿主生物體適應性很差的啟動子、靶蛋白融合與GFP折疊的位阻效應，以及多聚體亞單位的表達（注定要在內質網內終止），甚至克隆錯誤。

如果您是要了解GFP的激發光波長，請點擊下面鏈接：

GFP的激發光波長和GFP的發射光波長

EGFP是GFP突變系

(1)RedShifted(紅偏移)GFP突變系(EGFP & GFPS65T)
  色基發生了氨基酸取代，λmax(Excitation)偏移至490nm附近。紅偏移突變系的更大激發峰都落在常用濾色片的波長范圍內，所以獲得的熒光信號要比wtGFP明亮得多。同樣，FACS和共焦顯微鏡的氬離子光源的發射波長為488nm，對RedShifted突變系的激發效率也明顯高于wtGFP。EGFP發生了雙氨基酸取代，Leu(亮氨酸)取代Phe64(苯丙氨酸)，Thr(蘇氨酸)取代Ser65(絲氨酸)(Cormack et al.,1996)。基于等量溶解蛋白的光譜分析，由于Em(消光系數)的增加和色基構型的率，EGFP在488nm處激發后燈熒光強度為wtGFP的35倍(Cormack et al.,1996;Yang et al.,1996)。在相同條件下(489nm)測得EGFP得Em為53，000cm-1M-1，而wtGFP為9，500CM-1M-1，GFPS65T為55，000cm-1M-1(Patterson et al.,1997)。EGFP的色基構型在37℃比wtGFP或GFPS65T發光效率更高，在這一溫度下表達的EGFP可溶性蛋白95%為有效色基(Patterson et al.,1997)。GFPS65T為Thr取代Ser65的突變體(Heim et al.,1995)，同樣條件下，它的熒光強度強于wtGFP4～6倍，并且其的Redshifted激發峰位于490nm，但37℃時色基形成的效率不如EGFP。